【CCK-8中文说明书】CCK-8是一种广泛应用于细胞活性检测的试剂，常用于评估细胞增殖、毒性测试以及药物筛选等实验。其全称为Cell Counting Kit-8，是由日本同仁化学研究所（Dojindo）开发的一种基于WST-8的细胞活力检测试剂。由于其操作简便、灵敏度高、重复性好，CCK-8已成为实验室中常用的细胞分析工具之一。

本说明书旨在为用户提供关于CCK-8试剂的基本信息、使用方法及注意事项，帮助用户正确、安全地进行相关实验。

一、产品简介

CCK-8试剂的主要成分是WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸基)-2H-四唑𬭩内盐），它在细胞代谢过程中被还原为水溶性的甲臜（formazan）染料。这种染料的颜色深浅与活细胞数量成正比，因此可以通过分光光度计在450 nm波长下测定吸光度值，从而定量分析细胞活性。

二、适用范围

CCK-8适用于以下实验：

- 细胞增殖实验

- 药物毒性检测

- 抗肿瘤药物筛选

- 细胞凋亡研究

- 细胞存活率评估

三、试剂组成

CCK-8试剂通常以液体形式提供，主要成分包括：

- WST-8

- 还原型辅酶I（NADH）

- 其他辅助成分

建议在使用前检查试剂是否澄清透明，无沉淀或变色现象。

四、使用方法

1. 细胞培养：将目标细胞接种于96孔板或其他合适的培养皿中，按照实验要求进行培养。

2. 加入CCK-8试剂：根据实验设计，在适当时间点向每孔中加入一定量的CCK-8试剂。一般推荐终浓度为10%（v/v）。

3. 孵育：将培养板置于37℃、5% CO₂的恒温培养箱中孵育1-4小时，具体时间可根据细胞类型和实验目的调整。

4. 检测：使用酶标仪在450 nm波长下测定各孔的吸光度值（OD450）。

5. 数据分析：通过比较不同组别的OD值，计算细胞活性或增殖率。

五、注意事项

- CCK-8试剂应避光保存于2-8℃环境中，避免反复冻融。

- 使用前请充分混匀试剂，确保均匀性。

- 实验过程中应尽量避免气泡产生，以免影响检测结果。

- 不同细胞系对CCK-8的反应可能存在差异，建议先进行预实验确定最佳条件。

- 若需长期保存，可将未使用的CCK-8试剂分装后冷冻保存。

六、常见问题解答

Q1：CCK-8和MTT法有什么区别？

A：CCK-8相比MTT法具有更高的灵敏度和更好的线性范围，且无需进行溶剂溶解步骤，操作更简便。

Q2：CCK-8可以用于贴壁细胞吗？

A：可以，但需注意在加入试剂前尽量去除培养液，以减少背景干扰。

Q3：CCK-8能否用于悬浮细胞？

A：同样适用，但需注意细胞密度和孵育时间的控制。

七、安全提示

- CCK-8试剂对人体无明显毒性，但仍建议在通风良好的环境下操作。

- 避免直接接触皮肤或眼睛，如不慎接触，请立即用清水冲洗并寻求医疗帮助。

八、参考文献

1. Tsuruo, Y., et al. (1988). J. Biochem. 103(2): 431–436

2. Dojindo Laboratories. (2023). CCK-8 Technical Manual

3. Zhang, H., et al. (2017). Journal of Biological Methods, 4(1): 1–8

如需进一步了解CCK-8的应用或获取技术支持，请联系相关供应商或实验室技术人员。希望本说明书能为您提供实用的帮助。